在重組蛋白生產(chǎn)過(guò)程中，生物污染一直是一個(gè)不容忽視的問(wèn)題。生物污染的來(lái)源多種多樣，細菌、真菌、支原體、病毒等生物污染會(huì )造成嚴重的藥品質(zhì)量事件，威脅用藥患者生命安全。因此，對已生產(chǎn)的藥品或正在生產(chǎn)的藥品，我們要盡量準確的檢測其中的微生物與病毒的生物負荷，避免受到污染藥品流入市場(chǎng)。
漢騰生物擁有1200+㎡的GMP質(zhì)量控制實(shí)驗室，擁有國際一流的先進(jìn)設備，具備符合ChP, USP, EP等藥典要求的檢測能力，滿(mǎn)足全面的數據可靠性要求。
漢騰生物重組蛋白生產(chǎn)平臺擁有自主開(kāi)發(fā)的高表達CHO細胞株構建平臺，為客戶(hù)提供專(zhuān)業(yè)的雙抗特異性抗體（BsAb）和重組蛋白生產(chǎn)服務(wù)。
漢騰生物車(chē)間生產(chǎn)工藝流程圖
整個(gè)生產(chǎn)過(guò)程中，原材料（生物來(lái)源），細胞庫（主細胞庫，工作細胞庫），未加工原液物料（生物反應器收獲前），下游工藝的適當階段，原液等需要進(jìn)行微生物限度檢測，以確認各工序中微生物負荷在規定范圍內。
藥品生產(chǎn)過(guò)程中有關(guān)產(chǎn)品的微生物控制類(lèi)型主要包括無(wú)菌檢測、微生物限度檢測和支原體檢測。
無(wú)菌檢測
無(wú)菌檢查法系用于檢查藥典要求無(wú)菌的藥品、生物制品、醫療器械、原料、輔料及其他品種是否無(wú)菌的一種方法。若供試品符合無(wú)菌檢查法的規定，僅表明了供試品在該檢驗條件下未發(fā)現微生物污染。無(wú)菌產(chǎn)品的最終放行需遵循各國法規，《中國藥典》2020版1101無(wú)菌檢測法，USP-NF <71> STERILITY TESTS，EP 2.6.1，JP 4.06均對產(chǎn)品無(wú)菌檢測進(jìn)行了規定，其中《中國藥典》2020版在無(wú)菌檢查方面的要求，完善了滅菌法和無(wú)菌檢查用隔離系統的驗證及應用。
無(wú)菌檢測的方法主要包括直接接種法和薄膜過(guò)濾法兩種：
微生物限度檢查
本法適用非無(wú)菌產(chǎn)品的微生物限度檢測，檢驗全過(guò)程必須嚴格遵守無(wú)菌操作，防止再污染。防止污染的措施不得影響供試品中微生物的檢出。潔凈空氣區域、工作臺面及環(huán)境應定期進(jìn)行監測。如供試品有抗菌特性，應盡可能去除或中和。
微生物限度的檢測，《中國藥典》2020版1105&1106&1107，USP-NF <61> &<1111>，EP 2.6.12&5.1.4等對非無(wú)菌產(chǎn)品微生物限度檢查進(jìn)行了詳細規定，其中《中國藥典》2020版明確了半固體制劑的微生物限度標準，半固體制劑與液體制劑一樣應從嚴控制。
非無(wú)菌產(chǎn)品微生物限度檢測的方法主要包括平皿法、薄膜過(guò)濾法和MPN法三種：
支原體檢測
2020版《中國藥典》3301 支原體檢查法中規定，在進(jìn)行主細胞庫、工作細胞庫、病毒種子批、對照細胞以及臨床治療用細胞需進(jìn)行支原體檢查時(shí)，應同時(shí)進(jìn)行培養法和指示細胞培養法（DNA染色法）。病毒類(lèi)疫苗的病毒收獲液、原液采用培養法檢查支原體；必要時(shí)，亦可釆用指示細胞培養法篩選培養基。也可采用經(jīng)國家藥品檢定機構認可的其他方法。在進(jìn)行支原體檢驗時(shí)，需要建立專(zhuān)門(mén)的支原體檢驗室，以防止樣品的交叉污染。
采用傳統的方法進(jìn)行支原體檢查，其檢測周期長(cháng)，培養法至少4周，指示細胞法至少2周，對于某些藥物，病人亟需使用來(lái)挽救生命時(shí)，傳統方法不再適用。2020版《中國藥典》9201 藥品微生物檢驗替代方法驗證指導原則，USP-NF ?1071? RAPID MICROBIAL TESTS FOR RELEASE OF STERILE SHORT-LIFE PRODUCTS: A RISK-BASED APPROACH（無(wú)菌短貨架期產(chǎn)品放行的快速微生物檢查法）以及EP 2.6.7（2007年首次提出用PCR技術(shù)進(jìn)行支原體檢測的指導綱要）均提出替代檢驗方法的概念，即“在控制藥品微生物質(zhì)量中，微生物實(shí)驗室出于各種原因，如成本、生產(chǎn)量、快速簡(jiǎn)便及提高藥品質(zhì)量等需要而采用非藥典規定的檢驗方法（即替代方法）時(shí)，應進(jìn)行替代方法的驗證，確認其應用效果優(yōu)于或等同于藥典的方法?！?br />
微生物污染溯源調查
無(wú)菌檢測、微生物檢測及支原體檢測都是培養的方法來(lái)確定樣品是否被微生物污染。培養法更多依賴(lài)于人員的熟練操作，操作人員經(jīng)驗不足或操作不規范易形成假陽(yáng)性，樣品檢驗方法的不適用，又易形成假陰性的結果。假陰性與假陽(yáng)性的結果嚴重影響檢測結果的準確性，為患者用藥安全帶來(lái)極大隱患。
對于假陰性結果，若不能及時(shí)發(fā)現，則會(huì )導致污染批次產(chǎn)品正常放行，危及病人安全，最終導致產(chǎn)品召回，品牌受損，甚至工廠(chǎng)停工或倒閉。為避免假陰性的結果，更多的是對檢驗過(guò)程規范性，人員上崗操作能力的要求。
對于假陽(yáng)性結果，如果沒(méi)有找到造成污染的根本原因，法規是禁止進(jìn)行重復測試的，這就需要大量的調查以找到根源，若無(wú)法調查出根本原因，最終可能導致該批次產(chǎn)品的報廢。這就要求我們對微生物陽(yáng)性檢測結果進(jìn)行污染調查。
《中國藥典》2020版 9204 微生物鑒定指導原則中指出，“大多數非無(wú)菌藥品生產(chǎn)過(guò)程和部分無(wú)菌生產(chǎn)環(huán)境的風(fēng)險評估中，對所檢出微生物的常規特征包括菌落形態(tài)學(xué)、細胞形態(tài)學(xué)（桿狀、球狀、細胞群、孢子形成模式等）、革蘭染色或其他染色特性，及某些能夠給出鑒定結論的關(guān)鍵生化反應（如氧化酶、過(guò)氧化氫酶和凝固酶反應）進(jìn)行分析，一般即可滿(mǎn)足需要”、“非無(wú)菌產(chǎn)品的控制菌檢查一般應達到藥典規定的水平”、“無(wú)菌試驗結果陽(yáng)性、無(wú)菌生產(chǎn)模擬工藝（如培養基灌裝）失敗、環(huán)境嚴重異常事件時(shí)，對檢出的微生物鑒定至少達到種水平，必要時(shí)需達到菌株水平”。
傳統的表型鑒定技術(shù)包括觀(guān)察菌落的形態(tài)（如大小、顏色等）、染色、顯微鏡檢查以及生化鑒定等，微生物的表型具有一定的可變性，此外，傳統的表型鑒定技術(shù)依賴(lài)人員經(jīng)驗和培養條件，其在一些難以培養、生長(cháng)緩慢或需要特殊營(yíng)養的微生物鑒定方面的局限性大。
在應對藥品微生物污染事件時(shí)，傳統方法已不能滿(mǎn)足快速分型、準確鑒定、溯源分析的需要。因此，以分子生物學(xué)為代表的基因型鑒定方法逐漸得到應用?！吨袊幍洹?020版，對無(wú)菌或微生物檢測陽(yáng)性異常結果的調查，新增了1021細菌DNA特征序列鑒定法。如細菌16SrDNA測序技術(shù)、真菌18SrDNA測序技術(shù)。
微生物的溯源分析中涉及的病原微生物操作及鑒定，應該生物安全二級實(shí)驗室中進(jìn)行（P2），漢騰生物已于2022年取得P2實(shí)驗室資質(zhì)，可承接相關(guān)病原微生物的分離、純化、保種及鑒定等工作。
2017年中國加入ICH，中國醫藥行業(yè)充分利用中國加入ICH全面與國際接軌的時(shí)機，進(jìn)一步借鑒國內外成熟的、先進(jìn)的檢測技術(shù)和經(jīng)驗、結合我國藥品生產(chǎn)和質(zhì)量控制現狀，加強通用性技術(shù)要求的制定以及國際協(xié)調和統一。
漢騰生物QC擁有先進(jìn)的自動(dòng)化檢驗設備，配備了足夠的專(zhuān)業(yè)檢測人員，具有重組蛋白、抗體、疫苗等方面的檢測能力以及相關(guān)經(jīng)驗，建立了完善的生產(chǎn)前、生產(chǎn)中及生產(chǎn)后產(chǎn)品質(zhì)量控制策略。具備的檢測能力包括：
HPLC/UPLC類(lèi)：SEC, CEX, 肽圖，PR-HPLC;
電泳類(lèi)：CE-SDS, cIEF, SDS-PAGE, 核酸瓊脂糖電泳，IEF
免疫學(xué)類(lèi)：ELISA活性，免疫印跡，免疫電泳，HCP（CHO，E.coli, 人源細胞），SelectVII 殘留
生物學(xué)活性類(lèi)：細胞增殖抑制（MTT）,流式細胞法
微生物類(lèi)：微生物限度，無(wú)菌，細菌內毒素（凝膠法，動(dòng)態(tài)法）
其他常規理化類(lèi)：不溶性微粒，TOC,滲透壓，密度，蛋白含量（UV, Brandford）,水分，化學(xué)滴定反應，薄層色譜……
具備BLS-2實(shí)驗室資質(zhì)，符合生物安全的法規與要求。